固定細胞FISHプロトコル
＜試薬＞
FISHプローブ
ホルムアミド
エタノール
＜細胞の変性処理＞
細胞標本を70℃ホットプレート上で2時間ハードニング
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70℃の70％ホルムアミド／２×SSC中２分間変性処理
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氷冷した70％エタノールに５分浸漬
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別の70％エタノールで洗った後100％エタノールに５分浸漬
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風乾もしくは37℃インキュベーターで乾燥
＜プローブの変性処理＞ -
１スライドあたり10μlのプローブをチューブに入れ75℃で10分変性
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５分以上氷冷
＜ハイブリダイゼーション＞ -
細胞標本にプローブをアプライしカバーグラスをかける
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37℃で必要時間ハイブリダイズ
＜洗浄・検出（ダイレクト蛍光標識プローブの場合）＞ -
２×SSC中５分浸漬しカバーグラスを静かにはずす
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37℃の50％ホルムアミド／２×SSC中20分浸漬
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１×SSCですすいだ後１×SSC中15分浸漬
＜洗浄・検出（ハプテン標識プローブの場合）＞
- 1％BSA／４×SSC溶液で希釈した抗体を100μlアプライしパラフィルムでカバーする
- 37℃で1時間反応
- 0.1% Nonidet P-40 (0.05% Tween20)／４×SSCで10分×２回、４×SSCで10分×1回洗浄
DAPI染色後マウント
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蛍光観察